BÁO CÁO THỰC HÀNH
TÁCH CHIẾT DNA
1. Mục đích
- Tách chiết được DNA từ các mẫu vật sống.
2. Kết quả và giải thích
- Sau thực hiện quy trình thí nghiệm, thấy xuất hiện búi kết tủa trắng đục chứa DNA nằm lơ lửng trong lớp cồn.
3. Trả lời câu hỏi
Câu hỏi 1: Tại sao phải sử dụng dung dịch nước rửa chén bát hay dung dịch tẩy rửa?
Trả lời:
- Do DNA tồn tại trong nhân tế bào nên để tách chiết được DNA ra khỏi tế bào, cần phá vỡ mô để tách rời các tế bào và phá huỷ thành tế bào và phá huỷ màng tế bào, màng nhân bằng các dung dịch tẩy rửa hoà tan lipid nhằm giải phóng dịch nhân tế bào vào dung dịch chiết xuất.
Câu hỏi 2: Tại sao cần sử dụng nước dứa? Có thể thay nước dứa bằng dung dịch gì?
Trả lời:
- Nước dứa có chứa enzyme bromelain, một enzyme protease có khả năng phân cắt protein. Protein là thành phần cấu tạo nên màng tế bào và nhân tế bào, do đó bromelain có thể giúp phá vỡ các màng này và giải phóng DNA ra khỏi tế bào.
- Có thể thay thế nước dứa bằng nước thịt hoặc nước đu đủ.
Câu hỏi 3: Tại sao cần sử dụng cồn ethanol?
Trả lời:
- Việc cho ethanol vào hỗn hợp có tác dụng kết tủa DNA. Do ethanol nhẹ hơn nước, nên khi cho ethanol vào phía trên dịch chiết tế bào sẽ tách thành lớp trong suốt trong ống nghiệm. Lúc này, DNA sẽ đi từ dịch chiết tế bào lên, đẩy sát lại gần nhau và bị kết tủa dưới dạng vật chất có màu trắng đục.
Câu hỏi 4: Cần phải cải tiến, khắc phục điều gì để thu được kết quả tốt hơn?
Trả lời:
- Cần lưu ý các điểm sau để thu được kết quả tốt hơn:
+ Đeo bao tay và mặc đồ bảo hộ cẩn thận do DNA rất dễ bị nhiễm gây ra các sai sót cho các thí nghiệm tiếp theo.
+ Chọn lựa mẫu vật tốt, lưu trữ và xử lý đúng cách trước khi bắt đầu quá trình tách chiết.
+ Khi nghiền mẫu cần phải nghiền kỹ, đảm bảo các mô và thành tế bào đều bị phá vỡ.
+ Lựa chọn dung dịch tách chiết phù hợp với loại mẫu và ứng dụng cụ thể.
+ Sau khi tách chiết DNA, thực hiện các bước làm sạch để loại bỏ tạp chất (protein, RNA) có thể ảnh hưởng đến thí nghiệm tiếp theo.
+ Kiểm tra và đánh giá hiệu suất tách chiết bằng cách sử dụng các phương pháp như đo OD, điện di trên gel agarose, PCR,...